三种主流siRNA转染试剂对比:Lipo3000、RNAiMAX与Starvio
1、转染效率：Starvio和RNAiMAX在转染效率上表现优异，难分高下；而Lipo3000的转染效率受细胞类型影响较大。使用成本：Lipo3000和RNAiMAX都需要额外购买Opti-MEM培养基，增加了实验成本；而Starvio则无需额外购买特殊培养基，使用更为便捷。
如何选择siRNA转染试剂?
在选择siRNA转染试剂时，应综合考虑转染效率、细胞毒性和转染细胞的种类等因素。RFect转染试剂在转染效率和细胞毒性方面表现较好，但需注意其对原代细胞和悬浮细胞的转染效果。RNAiMAX在部分原代细胞中的转染效率较高，但细胞毒性也需考虑。Lipo2000的转染效率和细胞毒性相对较低，且对原代和悬浮细胞的转染效果较差。因此，在选择时应根据具体实验需求和细胞类型进行权衡。
选择合适的siRNA：确保所选的siRNA序列与靶基因的mRNA序列完全匹配，以提高转染效率和特异性。细胞培养：在转染前，确保细胞处于良好的生长状态，且细胞密度适中，以便siRNA能够均匀分布并有效转染。转染试剂的选择与优化 选择合适的转染试剂：根据细胞类型和实验需求，选择合适的转染试剂。
综上所述，Lipo3000、RNAi MAX和RFect V2都是目前实验室常用的siRNA转染试剂。在选择时，需要根据实验需求、细胞类型以及成本等因素进行综合考虑。
综上所述，在选择siRNA转染试剂时，研究者应根据实验需求、细胞类型、经费预算等因素综合考虑。Starvio以其极低的细胞毒性、高效的转染效率和便捷的使用方式，成为了一种值得推荐的选择。
RNA干扰(RNAi)实验步骤
实验前准备 试剂与材料 siRNA：靶基因特异性siRNA（设计或购买已验证的序列）及阴性对照siRNA（非靶向序列）。细胞：目标细胞系，如HEK29HeLa等。转染试剂：根据细胞类型选择Lipofectamine 2000/3000或RNAiMAX。培养基：完全培养基（含血清）和无抗生素培养基。
RNAi的基本过程包括三步：dsRNA由Dicer酶裂解为siRNAs，siRNAs与RISC复合物结合，RISC复合物识别并降解与siRNAs序列匹配的靶mRNA。 沉默效应的扩散：RNAi能够扩散到生物体的各个部分，即使初始触发物dsRNA数量很少。实验流程 RNAi研究分为siRNA设计、制备、转染、验证抑制效果、功能验证五个阶段。
RNAi的作用过程：第一步：dsRNA在Dicer酶的作用下加工裂解成21－23核甘酸长的小分子干扰RNA片段。Dicer酶是RNaseIII家族中特异识别双链RNA的一员，含2个催化结构域、1个螺旋酶结构域和1个PAZ基序。第二步：siRNAs与多种亚单位形成复合物—RNA诱导的沉默复合物（RISC）。
李记生物产品|siRNA转染试剂使用方法与注意事项
工作浓度与体积调整：建议siRNA/miRNA工作浓度在10-100nM之间。转染试剂的体积应根据siRNA/miRNA浓度和培养皿的大小进行调整，具体可参考表1中的用量指导。但需注意，该表使用量仅供参考，具体使用量还需根据细胞类型及其他实验条件进行优化。存储与运输：产品应蓝冰运输，并在4℃保存（有效期6个月）或-30℃至-10℃保存（有效期12个月）。
siRNA转染成功指南
1、siRNA准备：使用RNase-free water将siRNA配制成20μM的储存液，并分装避光保存。避免反复冻融超过5次，以保证siRNA的活性。转染试剂选择：根据实验需求选择合适的转染试剂，如Lipofectamine 3000试剂或riboFECT CP试剂。注意不同试剂的使用方法和配比。
2、转染步骤（以贴壁细胞为例）细胞准备：转染前一天，将细胞接种于培养板中，使转染时的细胞密度达到70%左右。稀释转染试剂：取适量Lipofectamine 2000，用Opti-MEM I Reduced Serum Medium稀释后，在室温下孵育5分钟。稀释siRNA：取适量荧光标记的siRNA（或未标记的siRNA），同样用Opti-MEM I Medium稀释。
3、首先，打开浏览器，进入IDT官网，在首页点击“TOOLS”选项，然后选择“Predesigned DsiRNA Selection Tool”或“RNAi Design Tool”，即可进入DsiRNA的设计页面。
如何使用Lipo3000进行siRNA的转染
转染过程的核心步骤可以总结为：首先，将125微升的Opti-MEM与5微升的Lipo3000混合，形成转染复合物。接着，为DNA准备一个步骤，将125微升的Opti-MEM加入1-5微克的DNA，再加入2-5微升的P3000（是DNA量的两倍），确保DNA与转染剂充分结合。为了获得最佳实验结果，Lipo3000推荐在6孔板上进行转染实验，这样可以保证充足的样本量和实验的可重复性。
转染试剂用量：建议每次转染使用5微升的lipo3000，这是一个折中的用量，既能保证转染效率，又能减少细胞毒性。DNA用量：根据细胞类型和实验需求，DNA的用量通常在1-5微克之间。转染siRNA的特别说明 当使用lipo3000进行siRNA转染时，无需添加P3000试剂。
转染量计算： lipo3000用量：直接使用5微升的lipo3000进行转染。 注意：若转染siRNA，则无需额外使用P3000。 实验操作步骤： 实验器材：建议使用6孔板进行实验，以提供足够的空间进行后续分析。 稀释与混合： 先用125微升的OptiMEM稀释lipo3000。
因此，在选择使用Lipo3000时，需要考虑所要转染的细胞对脂质体的毒性是否耐受。此外，使用Lipo3000进行转染复合物配制时，需要使用特殊培养基--Opti-MEM减血清培养基，这增加了实验成本。Lipofectamine RNAi MAX（RNAi MAX）RNAi MAX是目前国际公认的最为权威的siRNA转染试剂之一。
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